产品简介

         GenRec Assembly Master Mix Kit是一款简单、快速、高效的多片段DNA定向克隆产品，本试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。做法是：将载体在克隆位点进行线性化，并在插入片段PCR引物5'端引入线性化克隆载体末端序列，使得插入片段PCR产物5'和3'最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列(20 bp～40 bp)。将这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合，在重组酶的催化下，仅需反应15-60 min即可进行转化，完成定向克隆。克隆阳性率可达90%以上。 试剂盒中2×GenRec Assembly Master Mix预混了重组酶和重组反应所需缓冲液，并添加了特殊成分，可显著提高重组克隆效率，可以一次实现多至3-6个片段的顺序拼接克隆。

特点

•  简单，快速

•  无需考虑酶切位点，任何片段可克隆到任何目的载体的任何位置

•  克隆阳性率在90%以上，降低克隆筛选的工作量

•  插入基因片段不带无关序列，真正的无缝克隆

•  可同时进行最多6个DNA片段的组装

应用范围

•  快速定向克隆

•  无缝克隆

•  多片段插入和连接

•  快速定点突变，可同时实现多个位点的定点突变

产品说明

         单片段重组流程概览

         图一：使用2×GenRec Assembly Master Mix将一个基因片段克隆到目标载体，实验需要基因片段和线性化载体。该线性化载体可以通过限制性内切酶酶切载体获得，或者用反向PCR扩增环状载体获得。插入片段由PCR扩增获得，所用的两条引物在5'端添加线性化克隆载体末端序列（图中用绿色和橙色标记），这样获得的PCR产物5'末端和3'末端的序列和线性化载体末端的序列完全一致。

         多片段重组流程概览

         图二，使用2×GenRec Assembly Master Mix将四个基因片段克隆到目标载体。 该线性化载体可以通过限制性内切酶酶切载体获得，或者用反向PCR扩增环状载体获得。插入片段由PCR扩增获得，所用的两条引物在5'端添加同源序列（图中用多种颜色标记），最终使得多个片段能够按照设定的顺序组装进同一载体。例如A片段左边红色序列为和载体同源的序列，右端绿色序列为和B同源的序列。五种不同颜色的同源序列之间互不相同以确保片段按照既定顺序连接，避免产生错误连接。

产品内容

说明书 

2×GenRec 单段重组试剂盒使用说明书.doc

请发需求信息到公司邮箱protein@universalbiol.com；咨询热线：0550-3121009